武汉生物制品研究所

人T淋巴细胞亚群分群试剂

(抗CD5单抗)

 Ren T Linbaxibao Yaqun Fenqun Shiji (kang CD5 Dankang)

 Human T Lymphocyte Subgroup Typing Reagent

(Against CD5 Monoclonal Antibody)

 

本品系采用杂交瘤技术用人T淋巴细胞免疫BALB/c小鼠后,取脾细胞与BALB/c小鼠骨髓瘤细胞融合，得到稳定分泌抗CD5特异性抗体的杂交瘤细胞，用小鼠体内法制备抗体，经提纯冻干制成。用于各种免疫相关性疾患的辅助诊断、免疫治疗的疗效监测和预后判断以及基础免疫学、白血病分型等研究。

1  基本要求

1.1  设施与生产质量管理

符合现行版中国《药品生产质量管理规范》的要求。

1.2  原料及辅料

符合现行版《中华人民共和国药典》和国家批准的原辅材料质控标准的相关规定。

1.3  生产用水及生产用具

生产用的水源水符合国家饮用水标准，纯化水和注射用水符合现行版《中华人民共和国药典》的规定。生产用水的制备、贮存、分配和使用均符合现行版中国《药品生产质量管理规范》的要求。

直接用于生产的金属器具或玻璃器具等生产用具必须严格清洗和灭菌处理。

生产过程使用的过滤介质为无石棉的介质。

1.4  生产用动物

制备腹水使用普通级BALB/c小鼠。

2．制造

2.1 杂交瘤细胞

能稳定分泌鼠抗人T淋巴细胞CD5 单克隆抗体的杂交瘤细胞系WuT1，并符合现行版《中华人民共和国药典》“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”的有关规定。

2.2 杂交瘤细胞库建立

2.2.1原始细胞库

分泌鼠抗人T淋巴细胞CD5单克隆抗体的杂交瘤细胞株系武汉生物制品研究所自建，克隆株号为WuT1。

2.2.2主细胞库

由原始细胞库中传3代构建主细胞库，液氮保存。

2.3.1工作细胞库

从主细胞库的细胞中复苏一支，扩增培养3代冻存作为工作细胞库细胞。在每批腹水生产时取一支复苏、扩增及生产。

2.3 细胞库的细胞检定

2.3.1主细胞库检定

2.3.1.1 细胞鉴别试验

采用免疫荧光法测抗体对正常人外周血单核细胞的反应性，其正常值范围的参考指标为：59.4～78.4%。

 2.3.1.2 无菌检查

按现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫA检查，符合规定。

2.3.1.3  支原体检查

按现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫB检查，符合规定。

2.3.1.4细胞核型检查

可采用染色体检查法进行，检查100个细胞分裂中期的染色体，符合鼠-鼠杂交瘤特征（90－110条）。

2.3.1.5抗体分泌稳定性

杂交瘤细胞体外传代培养3个月以上能稳定分泌特异性抗体。液氮保存的细胞应能复苏、扩增培养和稳定分泌特异性抗体。

2.3.1.6 特异性检定

包括抗体相应靶抗原分子量的测定，与人的组织和细胞如胸腺、扁桃体、脾脏等以及与人外周血各细胞成分的反应性，与T白血病细胞系、B白血病细胞系的反应性；也可用已知单抗进行竞争抑制试验。应符合抗人T淋巴细胞CD5分化抗原单克隆抗体的特异性。

2.3.1.7 免疫球蛋白类及亚类

采用琼脂免疫双扩散试验法，用抗小鼠Ig类和亚类的特异性抗血清进行琼脂双扩散试验。（现行版《中华人民共和国药典》三部附录Ⅷ C）

2.3.1.8 亲和力

用ELISA方法，不低于10⁷mol/L。

2.3.2工作细胞库检定

按2.3.1.1项进行。

2.4 原液制备

2.4.1腹水制备

2.4.1.1 取工作细胞库中的杂交瘤细胞使其复苏并扩大培养。

2.4.1.2 取适量扩增培养的杂交瘤细胞接种小鼠腹腔，小鼠预先用降植烷预处理。

2.4.1.3 收集腹水，经离心处理后，取上清液分装，置-20℃以下保存。

2.4.1.4 腹水检定

按3.1项进行

2.4.2  抗体纯化

2.4.2.1  腹水预处理

腹水合并，滤纸过滤。

2.4.2.2  IgG提纯

采用辛酸－硫酸铵法纯化腹水提纯IgG。

2.4.3纯化后处理

2.4.3.1提纯的IgG经56℃～60℃30分钟处理，离心去沉淀，上清即为原液，测蛋白含量

2.5 半成品

2.5.1半成品配制

按测定的蛋白含量，原液用pH7.4 0.02mol/L的PBS稀释至所需浓度，加0.4%甘露醇，即为半成品。

2.5.2半成品检定

按3.2项进行。

2.6 成品

2.6.1 分批

2.6.1.1批号的编码顺序为“年  月  流水号”。年号写公历年号4位数，月份写2位数，流水号为2位数。同一批制品按冻干柜分亚批。

2.5.1.2 分装前最后一道工序即由原液混合、配制、稀释为半成品时编制成品批号。

2.5.2  分装及冻干

2.5.2.1 分装前加强核对，防止错批或混批。

2.5.2.2 全部分装过程中严格无菌操作。同一容器的制品应当日分装完毕。

2.5.2.3 制品的实际装量多于标签标示量，分装1ml者补加0.10 ml。

2.5.2.4 冻干全过程无菌操作，并有自动冻干曲线记录。

2.5.3规格

重溶后每瓶1ml ，含抗T淋巴细胞CD5抗原单克隆抗体（WuT1）0.2mg。

2.5.4包装

2.5.4.1 冻干后制品，经质量保证部检定和综合审评，对符合质量标准者发出包装通知单后进行包装。

2.5.4.2 制品在包装前必须进行外观检查。凡制品颜色异常、有异物、封口不严或裂纹等全部剔除。

2.5.4.3 制品包装标签及标签的内容、格式符合《中华人民共和国药品管理法》及国务院药品监督管理部门的有关规定。

2.5.4.4 包装前，按质量保证部发出的包装通知单所载有效期准备瓶签，瓶签上的字迹清楚。

2.5.4.5 包装制品在25℃以下进行。

2.5.4.6 每个最小包装盒内附有本制品的使用说明书。

3．检定

3.1  腹水的检定

效价测定

采用免疫荧光法测抗体对正常人外周血单核细胞(PBMC)的反应性，其正常值范围的参考指标为：59.4～78.4%，抗体效价不低于1：5000。

3.2 半成品检定

3.2.1蛋白质含量测定

依法测定（现行版《中华人民共和国药典》三部附录VIB第二法）。

3.2.2纯度测定

用SDS-PAGE电泳法（现行版《中华人民共和国药典》三部附录IVC），,Ig纯度不低于90％

3.2.3特异性和效价测定

采用免疫荧光法测抗体对正常人外周血单核细胞(PBMC)的反应性，其正常值范围的参考指标为：59.4～78.4%，抗体效价不低于1：5000。

3.4 成品检定

3.4.1外观

为白色疏松体，溶解后为略带乳光的澄清液体，不含有摇不散的沉淀。

3.4.2水分测定

不高于5.0%（现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅦD）。

3.4.3 特异性和效价测定

采用免疫荧光法测抗体对正常人外周血单核细胞(PBMC)的反应性，其正常值范围的参考指标为：59.4～78.4%，抗体效价不低于1：5000。

4．保存、运输及有效期

8℃以下保存及运输。自分装之日起有效期为3年。

5．使用说明

 

 

人T淋巴细胞亚群分群试剂

(抗CD5单抗)使用说明

 

【药品名称】

通用名称：人T淋巴细胞亚群分群试剂          (抗CD5单抗)

英文名称：Human T Lymphocyte Subgroup Typing Reagent(Against CD5 Monoclonal Antibody

 汉语拼音：Ren T Linbaxibao Yaqun Fenqun Shiji (kang CD5 Dankang)

【成分和性状】本品系采用杂交瘤技术用人T淋巴细胞免疫BALB/c小鼠后,取脾细胞与BALB/c小鼠骨髓瘤细胞融合，得到稳定分泌抗CD5特异性抗体的杂交瘤细胞，用小鼠体内法制备抗体，经提纯冻干制成。为冻干制剂，呈乳白色疏散固体状。

【作用与用途】检测人外周血和免疫组织以及其他实验研究细胞中人T淋巴细胞亚群的表型。常用于各种免疫相关性疾患（病）的辅助诊断、免疫治疗的疗效监测和预后判断以及基础免疫学、白血病分型等研究。

【规格】重溶后每瓶1ml，含抗T淋巴细胞CD5抗原单克隆抗体（WuT1）0.2mg

【使用方法】

1. 用前按标示量加Hanks液或PBS溶解，立即封装成小剂量，于-20℃保存备用。

2. 试验时用含5g/L BSA 和1. 0 /L NaN3 的Hanks液或PBS, 根据试验目的的不同，稀释成工作浓度。在2-8℃可保存1-2周。

3.根据样品和实验目的不同，可采用间接免疫荧光法、免疫组织化学染色法或致敏红细胞花环法等进行试验。

4.采用的检测方法不同，对单克隆抗体的浓度要求可能不同。必要时可先对单克隆抗体进行系列稀释，以确定最佳工作浓度。

5.参考值：采用间接免疫萤光法检测正常人外周血单个核细胞（PBMC）抗CD5淋巴细胞亚群数值范围为：59.4～78.4%。

【贮藏】于8℃以下避光保存和运输。

【包装】重溶后每瓶1ml，

10支/盒、1000支/箱

【有效期】3年。

【执行标准】本企业注册标准

【批准文号】国药准字S10930006

【生产企业】

企业名称：武汉生物制品研究所

生产地址：武汉市武昌临江大道9号

邮政编码：430060

电话号码：027-88840477

传真号码：027-88913353

网    址：www.wibp.com.cn